今日と明日は実用化技術（四国連携；ネギアザミウマ）の推進会議で高松に行きます．

NDさんにRickettsiaや蚊の細胞を送る準備のため検鏡していたら，蚊の細胞がえらい早く育っていたので予定外の植継ぎ．

ちょっとしたトラブルがあり私の学生のWTNB君に細胞培養系のRickettsiaのシーケンスをしてもらった．結果はちゃんとRickettsiaだったらしい．良かった．では，NDさん月曜日にRickettsiaを送ります．

植物防疫の３月号に掲載される「昆虫類やダニ類のDNAクローニング法の紹介」の校正原稿をISZKさんに送る．

昨日なぜ定量PCRが上手くいかなかったか少し（？）答えがでた．できるだけ早く再挑戦．あと，マイクロサテライトについてもOK．

Rickettsiaの細胞培養感染チェックを行った． しっかり感染してた．写真がどうも上手くいかないのでオミット．

COIの領域がちゃんと増えました．でも，シーケンスはちょっと待ってください．

定量が悲しい結果だった勢いで，コナカイガラムシのCOI領域のPCRを．プライマーはGullan et al (2010)のCOI（C1-J-2183とC1-N-2568)．

48時間chelexによる非破壊でDNAを抽出したトビコバチ．COIのDNAバーコード用のプライマーでPCR． やはり非破壊は今ひとつですね．5つ中３つからDNAを抽出．肝心の山口が１つ．沖縄産は２つ．来週以降カイガラムシと一緒にシーケンスします．

今日は定例の植継ぎ．それに加えてRickettsiaの植継ぎも．

朝から私の学生のWTNB君に定量PCRを教わる．実は，私はこれまでしたことがなかった．ちょうど忙しい時期に定量PCRを買ったので，そのまま学生さん達に覚えてもらい私はしなかった． 今日はRickettsiaの細胞培養を定量する目的でTaqMan Probe法で行った．新し…

某英語論文を第一著者に送る．

朝シーケンスをかけた結果がでた．私の予想に反してほとんど同じであった．ネギと花が違っていたらおもしろかったのに・・・

さて，Wolbachia論文を本格的にカキコする．

昨日からやっているトビコバチとコナカイガラムシのDNAの抽出だが，キレックスによる非破壊方式をしている．というのもトビコバチの標本を残したい意向があるからだ．で，48時間キレックスに漬かっていただくことにした．24時間経ったのでproKを一滴追加した…

山口県のHGSUR君に頼まれたトビコバチとコナカイガラムシからDNA抽出作業を開始．2日間かける予定である．

3つバンドが出たIYSVのシーケンスの準備をしている．

今，PLoS Oneから依頼されたreviewを返した．Reviewer１だそうな・・・

という結果でした．

現在も感染を確認．ただ，ひょっとしたら培養を始めたころのRickettsiaと今のRickettsiaは発現するmRNAに違いがあるような気がする．理由は簡単である．最初はボロボロと細胞を壊していたのだが 最近はそうでもない．とりあえず，来週は定量PCRをするので量…

結局，TaKaRaのキットでもインビトロジェンのOneStepキットでも出ないものは出なかった；；バンドの位置は違うがものは同じである．

英文原稿が英文校閲から返ってきた．さっそく，某氏にコメントを依頼．そして，今原稿を送った．

やっとEntomological Scienceのレビューを終わって送った．

というような組み合わせで交尾実験を香川のSGさんしてくださった．昨日はその遺伝解析をしたのだが，今ひとつだった．今日は新しいサンプルを一から作り直した．というのも，昨日使ったサンプルを顕微鏡でよーーーく観察したら・・・という状況だったからで…

昨日香川県のAIZWさんから分譲していただいたIYSVのRNAをRT-PCR．今回はいつもと違い作物種ごとの発生したIYSVである．TaKaRaのキットは2ステップなので逆転写するときに使うプライマーは任意の塩基(pd(N)6とかpd(T)n）になっている．今回このキットでだめな…

Rickettsiaの植継ぎ終了．

今日は香川県農業試験場でネギアザミウマの単性生殖系統と両性生殖系統の識別用マルチプレックスPCR法をおこないに行ってきます．

今日は私の学生のWTNB君の学位審査の日である．がんばってください．夜は飲みましょう．

MEGA5で28SとEF-1αの系統樹を描いた．Bootstrap値は異常に低い．にしても，あまり変異がない．

さらに，MEGA5でネギアザミウマのCOI領域の系統樹を描いた． IYSVもこの系統樹も見えないようにしている．論文化したら公表します．Out GroupはThrips imaginis．マルチプレックスPCR法の結果と系統樹の結果に整合性がある．